低速离心机在中性粒细胞磁珠分选中的应用
时间：2018-07-25
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来源：四川蜀科仪器有限公司
试剂耗材及设备：磁力分选器，磁柱，CD15磁珠试剂盒，磁珠分选缓冲液50ml，RP1640，1ml 枪及枪头，20微升枪与枪头，蜀科低速离心机，15ml离心管4支，细胞计数板。
步骤：
1. 制冰，保证磁力分选器可以放入冰盒内操作，在4-8℃内进行分选；
2. 配液磁珠分选缓冲液（50ml PBS液中含2mmol/L EDTA，0.5%BSA，PH=7.2）；
3. 将上步初步分选的中性粒细胞悬液用蜀科低速离心机300g离心10分钟，去上清；
4. 细胞重悬于磁珠分选缓冲液中，107细胞重悬于80微升缓冲液中；（如细胞数多按倍数增加）
5. 107细胞中加入20微升CD15磁珠；充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟；
6. 用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞，再次用蜀科低速离心机300g离心10分钟，去上清；
步骤：
1. 制冰，保证磁力分选器可以放入冰盒内操作，在4-8℃内进行分选；
2. 配液磁珠分选缓冲液（50ml PBS液中含2mmol/L EDTA，0.5%BSA，PH=7.2）；
3. 将上步初步分选的中性粒细胞悬液用蜀科低速离心机300g离心10分钟，去上清；
4. 细胞重悬于磁珠分选缓冲液中，107细胞重悬于80微升缓冲液中；（如细胞数多按倍数增加）
5. 107细胞中加入20微升CD15磁珠；充分混匀放入2-8℃避光孵育15分钟；
6. 用1-2ml缓冲液洗涤细胞/107细胞，再次用蜀科低速离心机300g离心10分钟，去上清；
7. 重悬细胞于缓冲液中，108细胞重悬于500微升缓冲液中；
8. 将磁力分选器置于冰盒中，用3ml缓冲液冲洗磁柱；
9. 将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中；
10. 用缓冲液冲洗磁柱，每次3ml，冲洗3次；
11. 除去磁场，把磁柱放置于15ml离心管上，用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱；
12. 离心管中收集的便是中性粒细胞；
13. 最后用蜀科低速离心机300g离心去上清，重悬细胞于10ml细胞培养液中，细胞计数。
8. 将磁力分选器置于冰盒中，用3ml缓冲液冲洗磁柱；
9. 将含有中性粒细胞的缓冲液加入磁柱中；
10. 用缓冲液冲洗磁柱，每次3ml，冲洗3次；
11. 除去磁场，把磁柱放置于15ml离心管上，用5ml缓冲液加压快速冲洗磁柱；
12. 离心管中收集的便是中性粒细胞；
13. 最后用蜀科低速离心机300g离心去上清，重悬细胞于10ml细胞培养液中，细胞计数。
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